荧光计-佰仪汇

产品参数

快速、准确、灵敏、特异的定量 DNA、RNA、蛋白质和内毒素检测

Invitrogen Qubit 荧光计能快速而准确地解答科研工作者经常遇到的问题：“是否为有足够的 DNA（或 RNA 或蛋白质）以进行检测？”这些核酸或者蛋白的定量对于下一代测序 (NGS)、PCR、转染、Western Blot、免疫检测等下游应用来说非常重要。

Qubit 荧光计可检出与靶分子特异性结合的荧光染料。优化后的 Qubit 检测试剂支持区分 dsDNA 和 ssDNA ，可区分完整和降解的 RNA，即使样本量较少或存在污染物也能检测。DNA、RNA 定量及 RNA 完整性和质量以及蛋白质定量的样本数据表明，在 Qubit 荧光计上运行的 Qubit 检测时生成的数据准确、精准、灵敏且选择性高。简单、直观的界面和内置计算器简化了流程。可在几秒钟内显示结果，并可将结果导出到计算机或下游设备。

详细说明

Qubit 荧光定量技术

Qubit 荧光计可检测 Qubit 检测试剂盒中与样本中靶分子高度特异性结合的荧光染料。这些染料只有与靶标结合时才会发射荧光信号、即使靶分子浓度较低时亦是，因此可提供灵敏的读数。染料可在数分钟内吸收，并可由 Qubit 荧光计在数秒内读取，然后将读数插值到标准曲线上。

荧光染料可选择性结合 DNA、RNA 或蛋白

Qubit 荧光计采用专业的曲线拟合算法，使用浓度已知的标准品绘制校准曲线。对于 DNA、RNA 或蛋白质浓度未知的样本，可通过比较样本与标准品的相对荧光单位 (RFU) 来计算浓度。这些测量的检测限特定于每次的检测。

Qubit 荧光检测技术具有高灵敏度，因此仅需 1 µL 的样品即可进行检测，即使是稀释样品亦是。因此其适合定量珍贵的样品。

准确、特异和灵敏

Qubit 4 和 Qubit Flex 荧光计都可以快速、精准地定量其检出的特异性分子，即使是特异性分子数量少的情况亦是。例如，Qubit 可进行 DNA 检测以检测双链或单链 DNA 分子（dsDNA 或 ssDNA）。这些检测对其靶向的 DNA 类型来说具有高度选择性，即使存在 RNA、其他类型的 DNA 或常见污染物（包括盐、自由核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质）也不会影响特异性。

DNA 定量分析

此检测中，Qubit dsDNA HS（高灵敏度）检测具有 0.2–100 ng 的线性检出范围，且对双链 DNA (dsDNA) 具有选择性，即使存在等量的 RNA 情况亦是如此。

Qubit dsDNA HS 检测试剂盒的灵敏度和选择性

Qubit dsDNA HS 检测可为已知递增数量的 dsDNA （绿色圆圈）回报准确、线性的结果，即使是在较低含量下亦是如此（插图，放大了比例尺的最低端）。这些特异于 DNA 的测量仅受到单独添加 RNA（红色三角形）或与 DNA 结合（蓝色方块）的 RNA 略微影响。

通过经优化可检出更高 dsDNA 浓度的 Qubit dsDNA HS 检测试剂盒和 Qubit dsDNA BR（宽范围）检测试剂盒，我们评价了 Qubit 4 和 Flex 荧光计以及竞品的准确度和精度。Qubit 仪器的准确度和精度比其他品牌更高，且 Qubit Flex 仪器的通量更高。

Qubit 荧光计的准确度和精度。

准确度可通过使用 Qubit dsDNA HS 检测试剂盒确定相对真实浓度的平均偏差来评价，而精度可使用 Qubit dsDNA BR 检测试剂盒确定各浓度下重复的变异系数 (CV) 来确定。低偏差百分比证明了 Qubit Flex 和 Qubit 4 荧光计的准确度，而低 CV 百分比则证明了其精度，特别是对 Qubit Flex 型号来说。在所测试的三台仪器中，竞品仪器的准确度和精度较低。

在2013年发表的一篇 PLoS One 文献中，Simbolo 等人报道 Qubit 荧光定量是一种可靠且高性价比的方法，可用于鉴定各种 NGS DNA 制备物，包括冷冻组织和 FFPE 样品中的 DNA。在他们测试过的仪器中，数据显示使用 Qubit 荧光计获取的 DNA 定量结果有着较高的重现性，并与 DNA 定量分析的 qPCR 数据一致，即使是对 FFPE 样品中部分降解的 DNA 来说也是一样。¹

¹ Simbolo M, Gottardi M, Corbo V, et al.DNA qualification workflow for next generation sequencing of histopathological samples.PLoS ONE.2013; 8: e62692. 全文

RNA 定量分析

Qubit 提供 RNA 检测试剂盒以同时检测完整的大 RNA 分子（如 rRNA 或较大的 mRNA）和完整的小 RNA 分子（如 microRNA 和 siRNA）。这些检测试剂盒对其 RNA 类型来说具有高度选择性，即使存在 DNA、其他类型的 RNA 或常见污染物亦是如此。在这项灵敏度检测中，Qubit RNA 和 microRNA 检测的结果均与其靶向 RNA 的实际浓度相当接近。

Qubit RNA 和 microRNA 试剂盒的准确度和选择性

将 x 轴上所列浓度的核糖体 RNA (rRNA) 添加到含有 2 μg/mL siRNA 的样品中。然后使用 Qubit microRNA 检测试剂盒、Qubit RNA 检测试剂盒和通过紫外吸光度定量的 NanoDrop A₂₆₀ 检测试剂盒对混合物进行检测。显示8个重复次数的结果平均值和标准差。NanoDrop 仪器（紫色条）的总 RNA 浓度检测限是 1.5 μg/mL，影响了其较低浓度下的准确度和精度。Qubit RNA 检测试剂盒（红色条）在较大范围内准确定量了 rRNA 浓度。Qubit microRNA 检测试剂盒（蓝色条）准确定量了 2 μg/mL 的 siRNA 浓度，而当 rRNA 从该量增加2到5倍时，准确性受到轻微影响。蓝色和红色趋势线分别指示了样本中的 siRNA 和 rRNA 的实际浓度。